多能干细胞培养基的准备与操作流程

一、实验准备

人多能干细胞培养基的配制步骤如下：

1. 解冻hPSCMediumSupplement：将其放置在2-8℃环境中解冻，融化后上下摇动混匀，按实际需求分装，可立即使用或储存于-20~-80℃，避免反复冻融。

2. 配制培养基：按照1:50的比例，将10mL的hPSCMediumSupplement加入500mL的hPSCMediumBasalMedium中，充分混合后即得人多能干细胞培养基（abs9403）。注意：配置后的培养基可在2-8℃稳定储存2-3周，不建议使用超过3周的人多能干细胞培养基。

3. 实验试剂平衡：在实验前，将人多能干细胞培养基放置于室温避光处平衡；PBS、消化液等应加热至37℃，注意培养基中的因子不可进行水浴加热。

二、操作方法（所有步骤需在无菌条件下进行）

hPSC细胞复苏

具体步骤如下：

1. 包被培养板：取6孔板/12孔板，每孔加入1mL/0.5mL的即用型基质胶（abs9410），轻轻晃动以确保完全覆盖底部，置于37℃培养箱中孵育1-2小时，取出后在超净工作台上平衡20分钟。如果暂不使用，可用Parafilm封口后储存于2-8℃，并在1周内使用。

2. 准备干细胞培养基：先将2-3mL的干细胞培养基加入15mL离心管中予以备用。

3. 解冻细胞：将冻存管快速浸入37℃温水中，快速摇动，在1-2分钟内完全解冻；注意迅速操作，以减少细胞暴露在室温中的时间。

4. 离心操作：将解冻的冻存液逐滴加入含有干细胞培养基的15mL离心管中，平衡后以1000rpm离心3分钟。

5. 重悬细胞：离心后弃去上清，添加1mL人多能干细胞培养基，轻柔吹吸混匀，大约吹吸3~5次。

6. 接种细胞：弃去已平衡的即用型基质胶，将均匀的干细胞悬液加入已包被的6孔板中，每孔补全至2mL的培养体系。

7. 细胞培养监测：接种后可通过倒置相差显微镜观察干细胞的密度及团块大小，理想情况下以4个细胞以上的团块为佳，轻轻晃动以确保细胞均匀分布，随后置于37℃、5% CO2恒温培养箱中培养，并于第2天观察细胞贴壁情况。

8. 定期换液：从复苏时间起，每24小时更换培养基一次，因活性成分仅能维持一天，需及时更换为新鲜培养基。

hPSC细胞传代

接下来是hPSC细胞的传代流程：

1. 清洗细胞：吸去原有培养基，慢慢加入1mL PBS缓冲液，轻轻摇晃后沿皿边吸去PBS。

2. 消化细胞：在6孔板中加入2mL/孔人多能干细胞消化液（abs9409），使其覆盖底部，置于37℃培养箱中消化2-5分钟。消化时间可根据细胞生长密度适当调整，若观察到克隆边缘及内部细胞出现间隙，即可结束消化。

3. 吹打细胞：消化结束后加入2mL人多能干细胞培养基，轻柔吹打以使细胞脱落，并转移至15mL离心管中。注意操作要轻柔，以避免形成单细胞聚集。

4. 离心分离：以1000rpm离心3分钟，弃去上清。

5. 接种：用干细胞培养基轻轻吹打细胞5-10次，吸去包被培养板中的基质胶，将细胞悬液加入培养板中，每孔补全至2mL的培养体系。

6. 定期换液：与复苏过程相同，保持每24小时更换为新鲜培养基。

hPSC细胞冻存

最后是hPSC细胞的冻存步骤：

1. 清洗、消化及吹打步骤同上。

2. 离心操作同上。

3. 重悬：用2mL ES/iPS细胞冻存液（abs9412）对干细胞沉淀进行轻柔吹吸混匀，然后将其加入冻存管中。

4. 标记冻存管：在冻存管上标明细胞类型、时间、操作者及细胞批次。

5. -80℃冰箱冻存：冻存管需直立放置于-80℃冰箱过夜，避免斜放及横放。

6. 液氮长效冻存：24小时后，将-80℃冰箱中的细胞转移至液氮中进行长期冻存。

不朽情缘MG提供优质的细胞培养和分化试剂盒，助力科研人员在多能干细胞研究中取得突破。我们的产品线涵盖十大热销试剂盒、类器官试剂盒及多因子检测等，期待为您的科研贡献更多力量。